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問答題假定你分離到一個(gè)E．coli 的 Thy-突變體，并推測(cè)有可能是ThyA 基因突變。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)方案用PCR從染色體DNA擴(kuò)增突變的ThyA 基因，測(cè)定突變的序列。（注：E．coli 野生型的 ThyA 基因的序列是已知的）

參考答案： 為了擴(kuò)增突變體的thyA基因，先設(shè)計(jì)一對(duì)引物，其中一個(gè)引物的序列與 thyA基因的5’端相同，另一個(gè)引物同該基...

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1.問答題欲將一真核生物的結(jié)構(gòu)基因克隆后轉(zhuǎn)移到原核生物（如 E．coli）中進(jìn)行表達(dá)，克隆時(shí)應(yīng)注意哪些問題？

參考答案：應(yīng)注意的問題有：?jiǎn)?dòng)子、密碼子、剪接、分泌。

2.問答題欲將一真核生物的結(jié)構(gòu)基因克隆后轉(zhuǎn)移到原核生物（如 E．coli）中進(jìn)行表達(dá)，克隆時(shí)應(yīng)注意哪些問題？

參考答案：應(yīng)注意的問題有：?jiǎn)?dòng)子、密碼子、剪接、分泌。

3.問答題用限制性內(nèi)切核酸酶切割 DNA 后，經(jīng)電泳檢查，發(fā)現(xiàn)有拖尾現(xiàn)象，其可能的原因是什么？

參考答案：可能的原因有：蛋白與 DNA的結(jié)合、酶混雜、酶切條件不合適、有外切核酸酶污染等。

4.問答題在構(gòu)建cDNA文庫(kù)時(shí)，為什么常用GC接尾而不用AT接尾法連接？

參考答案：GC接尾法，可通過載體的PstI的切點(diǎn)回收外源片段，而AT接尾尚無(wú)回收的好辦法。

5.問答題Muller的PCR 反應(yīng)同大腸桿菌體內(nèi)的 DNA復(fù)制有哪些不同？你認(rèn)為根本的差別在哪里？

參考答案：PCR用雙引物，體內(nèi)復(fù)制用單引物。