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問答題欲將一真核生物的結構基因克隆后轉移到原核生物（如 E．coli）中進行表達，克隆時應注意哪些問題？

1.問答題用限制性內切核酸酶切割 DNA 后，經電泳檢查，發(fā)現(xiàn)有拖尾現(xiàn)象，其可能的原因是什么？

2.問答題在構建cDNA文庫時，為什么常用GC接尾而不用AT接尾法連接？

3.問答題Muller的PCR 反應同大腸桿菌體內的 DNA復制有哪些不同？你認為根本的差別在哪里？

4.問答題何謂 YAC？主要特性是什么？

（1）含有來自其他生物 DNA的酵母人工染色體，叫 YAC；
（2）主要特性是可以克隆較大的外源片段。

5.問答題酵母人工染色體要在酵母細胞中穩(wěn)定存在，必須有哪些基本的結構？

（1）著絲粒；
（2）端粒；
（3）ARS序列。